文件名称:农业部关于印发《2017年动物源细菌耐药性监测计划》的通知

文件编号:农医发[2017]4号

发布时间:2017-02-14

实施时间:2017-02-14

附件5  

药敏试验检测试剂盒（MIC测定）使用方法

1. 范围

本方法规定了动物源细菌（大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌和金黄色葡萄球菌）药敏检测试剂盒的使用方法。

2. 材料

除微生物实验室常规灭菌设备外，其他设备和材料如下：

2.1 恒温培养箱35±2℃

2.2 生物安全柜

2.3 浊度计或者标准比浊管

2.3 微量加样器1uL-1000uL

2.4 吸头（与微量加样器匹配）

3. 操作步骤

3.1 取出试剂盒，打开包装待用。

3.2 菌液制备

将无菌棉签用生理盐水润湿后，直接取过夜培养皿上数个新鲜菌落，与适量无菌生理盐水混匀。然后，用标准比浊管或者浊度计校正菌液浓度至0.5麦氏单位（1-2×108CFU/mL）。最后，用试剂盒中的肉汤100倍稀释，混匀备用。

3.3 菌液接种

除空白对照外，其余的95孔加入制备好（用前要混匀）的菌液100µL

空白对照孔中加入100µL无菌肉汤。盖好板盖并记录菌号。

3.4 孵育

将检测板置于35℃±2℃很稳培养箱中孵育16-18小时。

3.5 观察结果

在衬有黑底板的光线下，用肉眼观察。

先观察阴性对照孔和阳性对照孔：阴性对照孔应无细菌生长，孔内液体未见浑浊；阳性对照孔内应有细菌生长所形成的圆形或者网状沉淀。

如果阴性和阳性对照结果正常，继续观察其余孔内细菌生长情况，在无细菌生长的孔内所含最低抗菌药物浓度即为最低抑菌浓度（MIC）。

4. 结果记录

将MIC结果记录在耐药性检测结果统计表（附件6）中。